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产品信息 >> 试剂 >> 核酸提取;
DNA Gel Extraction Kit

DNA凝胶回收试剂盒

DNA Gel Extraction Kit

 

说明书下载:RN0078.pdf

 

CAT#:RN0078

产品规格:50次

产品价格:126元

保存条件:干燥、室温(15-25℃)保存,一年有效。

自备试剂:无水乙醇

 

产品简介:

本试剂盒采用新型硅基质膜技术,通过快速,简单的结合-洗涤-洗脱步骤可从大量普通或低熔点琼脂糖凝胶中回收纯化50 bp-50 kb的DNA片段,溶胶速度快,每个吸附柱最高可吸附30 μg的DNA,纯化过程中有效去除引物、核苷酸、酶、矿物油、琼脂糖等杂质,获得高纯度,完整性好的DNA片段,回收率高达90%。本试剂盒回收纯化的DNA可直接用于测序、连接和转化、酶切、标记、体外转录等分子生物学实验。

 

注意事项:

    第一次使用前在溶液II(洗涤液)中按标签说明要求加入无水乙醇,混匀,并在瓶上做好标记。

    温度较低时,溶液I可能会有沉淀产生。使用前必须检查一遍。如有沉淀,37℃水浴加热溶解,混匀后使用。

    本试剂盒所有操作均在室温进行,操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。

 

使用说明:

1. 切胶回收后,称重,将胶切碎或在离心管内用1ml枪头捣碎。

2. 加入等体积的溶液I(如胶为100mg,则加100微升溶液I),vortex或颠倒混匀。

3. 50-60℃水浴加热约10分钟至胶全融,期间,需vortex或颠倒混匀3-4次,以加速凝胶融解。

如果胶碎片较小,3-5分钟即可全融,凝胶碎片较大则需较长时间,胶全融后至少再在50-60℃水浴加热2分钟。50-60℃间任一温度都适合于本试剂盒。如果DNA片断大于5kb,宜颠倒混匀。Vortex容易导致大片断DNA断裂。

4. 加入到DNA纯化柱内, 室温放置1分钟。

如果体积较大,DNA纯化柱内容纳不下,可以把部分样品加入到纯化柱内,经离心处理后,再加入剩余的样品继续处理。

5. 最高速(16000g,约12000-14000rmp左右)离心1分钟,倒弃收集管内的液体。

注意:这一步一定要达到16000g,较低离心速度会导致回收效率下降。

6. 在DNA纯化柱内加入700微升溶液II,室温放置1分钟。

7. 最高速离心1分钟,洗去杂质。倒弃收集管内的液体。

8. 再加入500微升溶液II,最高速离心1分钟,进一步洗去杂质。倒弃收集管内的液体。

9. 最高速再离心1分钟,除去残留液体并让残留的乙醇充分挥发。

10. 将DNA纯化柱置于1.5毫升离心管上,加入30微升溶液III至管内柱面上,放置1分钟。

用1.5ml离心管作为收集管。溶液III需要直接加至管内柱面中央,使液体被纯化柱吸收。如果不慎将溶液III沾在管壁上,一定要震动管子,使液体滑落到管底,以便被纯化柱吸收。也可以用重蒸水或MiliQ级纯水替代溶液III,但是水的 pH应不小于6.5。如需得到较高浓度的DNA,可以只加20微升溶液III,但产量会略有下降。放置较长时间例如3-5分钟,会对提供产量略有帮助。

11. 最高速离心1分钟,所得液体即为高纯度DNA。

 

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