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产品信息 >> 试剂 >> ECL发光
Superstar ECL Plus/超敏ECL化学发光试剂盒(CAT#:RP0084)
超敏ECL化学发光试剂盒
Superstar ECL Plus  
 
说明书下载:RP0084.pdf
 
CAT#:RP0084
产品规格:50ml
产品价格:162元
保存条件:4℃避光保存,一年有效。如果长期不用,可以-20℃保存更长时间。
 
产品描述:
ECL Plus超敏发光试剂盒用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶HRP的抗体及其关联的抗原。由于采用了独特的发光底物系统,ECL Plus超敏发光液是目前最灵敏的商业化荧光ECL检测试剂。  
用途:
用于HRP标记抗体的Western Blot和HRP标记探针的核酸杂交。  
使用方法:  
(1)执行常规SDS-PAGE、转膜和Western Blot步骤。注意用HRP标记lgG或用一抗-链亲和素-生物素-HRP夹法。  
(2)Western Blot最后一次洗膜的同时新鲜配制发光工作液:分别取等体积的溶液A和B,放入干净容器中混合。建议立即使用工作液,室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。  
(3)用镊子取出膜,搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。将膜完全浸入发光工作液(0.125mL发光工作液/cm2膜)中,与发光工作液充分接触。室温孵育3分钟,准备立即压片曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度,有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应,使用过少的发光工作液不利反应进行,也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。为达节约目的可将膜剪小但勿降低发光液用量。  
(4)用镊子夹起膜,搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。  
(5)打开X光胶片暗盒,在暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将Western Blot膜贴在保鲜膜上,将保鲜膜折起来完全包裹Western Blot膜,去除气泡和皱褶,可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖Western Blot膜的保鲜膜固定在暗盒内,蛋白带面向上。  
(6)暗房内压X光胶片,分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。     
注意事项:  
(1)步骤1~5可在日光灯下操作;但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低,移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。  
(2)长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。  
(3)发光工作液孵育约3分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见,低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使X光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光,因而弱带可曝光1-10小时。如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用ECL发光和曝光。  
(4)某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜。  
(5)使用肉眼可见的预染色蛋白Marker和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。  
(6)NaN3能抑制HRP活性,回收第二抗体应避免使用NaN3,如必需使用勿超过0.01%。
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